El ensayo de toxicidad algal según la norma ISO 8692 es un método estandarizado utilizado para evaluar la toxicidad de sustancias químicas o efluentes en algas verdes unicelulares de agua dulce. Este ensayo mide la inhibición del crecimiento de las algas como indicador de la toxicidad del compuesto o mezcla en cuestión.
1. Aplicaciones
Este ensayo es crucial en la evaluación del riesgo ambiental de productos químicos, pesticidas, efluentes industriales, entre otros, para proteger los ecosistemas acuáticos. Es ampliamente utilizado en estudios de ecotoxicología y para cumplir con requisitos regulatorios de agencias ambientales.
2. Importancia del Ensayo
- Sensibilidad: Las algas son organismos fotosintéticos primarios en muchos ecosistemas acuáticos, y su sensibilidad a contaminantes puede proporcionar una primera señal de perturbaciones ambientales.
- Relevancia Ecológica: El ensayo refleja potenciales efectos adversos sobre las ases de las cadenas alimentarias acuáticas.
- Este método proporciona datos esenciales para la clasificación y etiquetado de sustancias peligrosas y ayuda a identificar y minimizar riesgos ambientales asociados con la liberación de productos químicos.
3. Preparación del Ensayo
- Las algas se cultivan en un medio adecuado para su crecimiento.
- Se preparan varias diluciones de la sustancia de prueba para obtener una gama de concentraciones que permita evaluar la respuesta dosis-dependiente.
- Se incluyen controles negativos (sin la sustancia de prueba) para establecer una línea base de crecimiento algal.
4. Condiciones Experimentales
- Las algas se incuban bajo condiciones controladas de luz, temperatura y agitación durante el período del ensayo.
- Es crucial mantener condiciones óptimas para el crecimiento de las algas y evitar factores externos que puedan influir en los resultados.
5. Organismos que testar
Se utiliza una especie de alga verde unicelular, comúnmente Pseudokirchneriella subcapitata (anteriormente llamada Selenastrum capricornutum), debido a su sensibilidad y rápido crecimiento.
6. Principio del Ensayo
- El ensayo mide el efecto de diferentes concentraciones de la sustancia de prueba sobre el crecimiento de las algas a lo largo de un período determinado, generalmente 72 horas.
- El crecimiento de las algas se cuantifica midiendo la densidad celular, la cual se puede evaluar por métodos directos (como el recuento de células) o indirectos (como la medición de la absorbancia o fluorescencia de la clorofila).
7. Consideraciones
Antes de seleccionar un incubador o cámara para ensayos climáticos, es importante considerar el espacio disponible en el laboratorio, el número de muestras que se planea analizar simultáneamente y las necesidades específicas del ensayo.
8. Equipo utilizado
- Camara climática para el crecimiento de algas EGCHS ALG 705 HR 2L LED, con luces LED de 4000 K en los estantes.
- Como segunda opción: Incubador de crecimiento de TestingLab modelo ERIS ALG INOX LED.
- Agitador orbital para matraces tipo Kitasato o Erlenmeyer.
9. Control de Temperatura
- Rango de Temperatura: Generalmente, el ensayo se realiza a una temperatura constante de 21-24°C. Es crucial que el incubador mantenga esta temperatura de manera estable durante todo el ensayo.
- Precisión: La precisión en el control de la temperatura debe ser de ±0.5°C para evitar fluctuaciones que puedan afectar el crecimiento algal.
10. Iluminación
- Intensidad Luminosa: Las algas requieren luz para crecer, ya que realizan fotosíntesis. El incubador debe proporcionar una iluminación constante con una intensidad de 60-120 µmol/m²/s (micromoles de fotones por metro cuadrado por segundo), medida a la altura de los cultivos de algas.
- Espectro Lumínico: La luz tiene un espectro adecuado para la fotosíntesis, comúnmente se utilizan luces LED de amplio espectro, por ejemplo, 4000K, que simulan la luz solar, optimizadas para el crecimiento de algas.
- Fotoperiodo: Se puede utilizar un fotoperiodo de 24 horas de luz continua o, en algunos casos, un ciclo de luz/oscuridad (p. ej., 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad), dependiendo de los requisitos específicos del ensayo.
- En algunas ocasiones se aconseja la utilización de lámparas LED con diferentes espectros, controlables independientemente.
11. Agitación
- Agitación Orbital: Para asegurar una suspensión homogénea de las algas en el medio de cultivo, los frascos de ensayo se mantienen en agitación constante. Los incubadores suelen estar equipados con plataformas agitadoras orbitales con velocidades ajustables, generalmente en el rango de 100-150 rpm.
- Flujo de Aire: El equipo permite opcionalmente la ventilación controlada o la provisión de un flujo de aire estéril para evitar la acumulación de gases y mantener la calidad del medio.
12. Control de Humedad
Ambiente Húmedo. Aunque no siempre es necesario, el equipo estará equipado opcionalmente con un sistema de control de humedad para evitar la evaporación del medio de cultivo, lo cual es especialmente importante en ensayos prolongados.
13. Capacidad y Configuración
- Capacidad: El incubador seleccionado debe ser lo suficientemente grande para albergar el número requerido de frascos de ensayo y controles, asegurando que cada frasco reciba una cantidad uniforme de luz y que no haya sombra entre ellos.
- Configuración Modular: Los equipos EGCHS ALG y ERIS ALG de TestingLab permiten la configuración modular de estantes y plataformas para acomodar diferentes tamaños de recipientes.
14. Monitoreo y Registro de Datos
- Monitoreo Continuo: El equipo esta equipado con un sistema de monitoreo continuo de temperatura, luz, humedad y opcionalmente CO2, con registros automáticos para asegurar la calidad del ensayo.
- Alarmas: El equipo incorpora alarmas para alertar sobre cualquier desviación de las condiciones establecidas, como cambios en la temperatura, humedad, luz o concentración del CO2.
